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檢測某一個基因的表達(dá)產(chǎn)物或者要比較表達(dá)產(chǎn)物量的相對變化，方法是westernblot。而WesternBlot試驗中比較這些的前提條件是等量的細(xì)胞上樣，這樣才有比較的基礎(chǔ)。而人為的操作會產(chǎn)生一定的誤差，這些誤差可以通過測定每個樣品中實際轉(zhuǎn)到膜上的內(nèi)參來校正。因此選擇一個合適的內(nèi)參抗體來校正上樣誤差是非常重要的。所以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)腤esternBlot實驗設(shè)計中需要有良好的參照體系，后續(xù)的實驗結(jié)果分析才具有說服性。在WesternBloting實驗中，可能內(nèi)參即是內(nèi)部參照(Intern...

激動劑抑制劑可抑制腸神經(jīng)系統(tǒng)釋放ACh,減緩胃腸道動力.在健康人，哌波色羅能對抗西沙必利對結(jié)腸的促動力作用，延緩結(jié)腸傳輸，但不改變結(jié)腸的感覺和順應(yīng)性；拮抗外源性.5-HT所致的腸道蠕動反射。在腹瀉型IBS患者中，哌波色羅可以延長口-盲傳輸，使結(jié)腸蠕動減弱，降低直腸敏感性，從而改善患者的癥狀。激動劑抑制劑可升高觸發(fā)小腸蠕動的壓力感受閾值和降低小腸壁的順應(yīng)性。Meuse等發(fā)現(xiàn)在脊髓背角淺層初級傳入神經(jīng)末梢有5-HT7受體的表達(dá)，參與大鼠傷害性感受器的激活。目前尚無5-HT7受體制...

細(xì)胞因子還廣泛效果于神經(jīng),內(nèi)分泌系統(tǒng),對細(xì)胞間相互效果、細(xì)胞的增殖分解和效應(yīng)功用有重要的調(diào)節(jié)效果.細(xì)胞因子發(fā)揮廣泛多樣的生物學(xué)功用是經(jīng)過與靶細(xì)胞膜外表的受體相結(jié)合并將信號傳遞到細(xì)胞內(nèi)部.因此,了解細(xì)胞因子受體的結(jié)構(gòu)和功用關(guān)于深入研究細(xì)胞因子的生物學(xué)功用是*的.跟著對細(xì)胞因子受體的深入研究，發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞因子受體不同亞單位中有同享鏈現(xiàn)象，這對說明很多細(xì)胞因子生物學(xué)活性的相似性和差異性從受體水平上提供了根據(jù)。絕大多數(shù)細(xì)胞因子受體存在著可溶性方式，把握可溶性細(xì)胞因子受體發(fā)生的規(guī)則及其生...

在westernBlot過程中，蛋白Marker雖然是其中小小的一環(huán)，但是這個小細(xì)節(jié)對實驗結(jié)果的影響不可忽視。Marker在蛋白電泳中的作用主要是用來指示蛋白條帶所對應(yīng)的分子量大小，只有標(biāo)準(zhǔn)量無誤，實驗結(jié)果才有說服力。此外，Marker還能顯示轉(zhuǎn)膜是否成功以及蛋白在凝膠上的電泳程度的作用。因此選擇正確的蛋白Marker也是westernblot實驗成功的必要條件之一。總體來說，蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)可以分成未染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)、預(yù)染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)二個級別。未染色的蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)未染色的...

淋巴細(xì)胞分離液取新鮮抗凝血1ml，與生理鹽水1:1混勻后，小心加于2ml細(xì)胞分離液之液面上；以400g（約1500轉(zhuǎn)/分，半徑15cm水平轉(zhuǎn)子）離心20分鐘，此時離心管中由上至下細(xì)胞分四層。*層：為血漿層。第二層：為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層。第三層：為透明分離液層。第四層：為紅細(xì)胞層。收集第二層細(xì)胞放入含生理鹽水4-5ml的試管中，充分混勻后，以400g（約1500轉(zhuǎn)/分）離心20分鐘。沉淀經(jīng)2次洗滌后即得所需淋巴細(xì)胞。淋巴細(xì)胞分離液方法，取肝素抗凝血1ml加Hanks液1m1稀...

Westernblotting是一個步驟繁多的實驗，每一步都會對zui后的結(jié)果產(chǎn)生影響，電泳過程是其中關(guān)鍵重要的一步。好的電泳能讓目的條帶整齊，結(jié)果圖讓人眼前一亮。要做好電泳也并非易事，凝膠質(zhì)量在其中扮演著重要作用。電泳的支持介質(zhì)為聚丙烯酰胺凝膠，該凝膠的聚合由丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺單體在自由基的催化下完成。常用的催化聚合方法有兩種，分別為化學(xué)聚合法和光聚合法，實驗室配制凝膠通常為化學(xué)聚合。在聚合過程中，TEMED催化過硫酸銨產(chǎn)生自由基引發(fā)丙烯酰胺單體聚合，同時甲叉雙丙烯酰...

預(yù)染marker易于使用–與上樣緩沖液預(yù)先混合，可直接凝膠上樣，無需煮沸。條帶清晰–亮度類似，但顏色不同的條帶便于觀察。質(zhì)量檢測–每批次均經(jīng)過SDS-PAGE和Westernblotting驗證。兩個參考條帶–70kDa為橙色，10kDa為綠色。與膜兼容–Westernblotting時彩色條帶將轉(zhuǎn)移到膜上應(yīng)用，監(jiān)測SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳期間蛋白的遷移。監(jiān)測Westernblotting蛋白轉(zhuǎn)移到膜上的情況。測定SDS聚丙烯酰胺凝膠和Westernblots上的蛋白分子量。...

絲裂原活化蛋白激酶MAPK（mitogen-activatedproteinkinase）是信號從細(xì)胞表面?zhèn)鲗?dǎo)到細(xì)胞核內(nèi)部的重要傳遞者，其調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子和相關(guān)酶的活性，參與細(xì)胞增殖、分化、轉(zhuǎn)化及凋亡的調(diào)節(jié)，并與炎癥、腫瘤等多種疾病的發(fā)生密切相關(guān)。MAPK是一組能被不同的細(xì)胞外刺激，如細(xì)胞因子、神經(jīng)遞質(zhì)、激素、細(xì)胞應(yīng)激及細(xì)胞黏附等激活的絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶。該通路的基本組成是一種從酵母到人類都保守的三級激酶模式，包括MAPK激酶激酶（MAPkinasekinasekinase，...