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淋巴細胞分離液的基本理論

更新時間:2017-10-11      點擊次數(shù):2957
  淋巴細胞分離液取新鮮抗凝血1ml,與生理鹽水1:1混勻后,小心加于2ml細胞分離液之液面上;以400g(約1500轉(zhuǎn)/分,半徑15cm水平轉(zhuǎn)子)離心20分鐘,此時離心管中由上至下細胞分四層。*層:為血漿層。第二層:為環(huán)狀乳白色淋巴細胞層。第三層:為透明分離液層。第四層:為紅細胞層。收集第二層細胞放入含生理鹽水4-5ml的試管中,充分混勻后,以400g(約1500轉(zhuǎn)/分)離心20分鐘。沉淀經(jīng)2次洗滌后即得所需淋巴細胞。
 
  淋巴細胞分離液方法,取肝素抗凝血1ml加Hanks液1m1稀釋后,沿管壁徐徐滴流疊加盛有2m1淋巴細胞分離液的試管內(nèi)(注意勿與分離液混合,然后2000r/min水平離心20min,醫(yī)學(xué)|教育|網(wǎng)搜集整理管內(nèi)分為4層,自上而下依次為血漿,單個核細胞,顆粒白細胞、紅細胞(圖2-1)。用毛細管伸至單個核細胞層中(位于細胞分離液與血漿的界面上),沿管壁輕輕吸出全部細胞。然后用Hanks液洗兩次,每次r/min離心10min,zui后用RPMIl640培養(yǎng)液將細胞配成2×106/m1的細胞懸液備用。
 
  淋巴細胞分離液主要組成成份是葡聚糖(右旋糖酐)與泛影酸葡甲胺。適用于從人抗凝血液中分離單個核細胞(主要為淋巴細胞),無菌條件下所分離的細胞可用于免疫學(xué)檢測。
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