在western Blot過程中,蛋白Marker雖然是其中小小的一環(huán),但是這個(gè)小細(xì)節(jié)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響不可忽視。Marker在蛋白電泳中的作用主要是用來指示蛋白條帶所對(duì)應(yīng)的分子量大小,只有標(biāo)準(zhǔn)量無誤,實(shí)驗(yàn)結(jié)果才有說服力。此外, Marker還能顯示轉(zhuǎn)膜是否成功以及蛋白在凝膠上的電泳程度的作用。因此選擇正確的蛋白Marker也是western blot實(shí)驗(yàn)成功的必要條件之一。總體來說,蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)可以分成未染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)、預(yù)染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)二個(gè)級(jí)別。
未染色的蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)
未染色的蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)是zui簡單,也是zui準(zhǔn)確的一種。由于沒有附帶染料分子或者是標(biāo)記分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,是判斷蛋白大小必須的。未預(yù)染的Marker可分為寬分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)、高分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)以及低分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)。
① 寬分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)
如果從實(shí)驗(yàn)的整體考慮的,就選擇范圍盡量寬條帶分布比較均勻的,這樣容易判斷你的蛋白在哪個(gè)區(qū)間。不過蛋白marker條帶越多,每次上樣量也就越費(fèi)。如果買的是大包裝,建議分裝成小體積使用,多次反復(fù)凍融不利于蛋白marker的保存和繼續(xù)使用。
② 高分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)
通常在檢測(cè)大分子量蛋白經(jīng)常使用到高分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)。
③ 低分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)
在一般的蛋白電泳當(dāng)中,更常用的是低蛋白標(biāo)準(zhǔn)分子量,除了有指示蛋白大小的作用以外,有時(shí)還可以用作粗略的定量。特別小的蛋白Marker條帶如果要顯色好,一定要保證足夠的上樣量。
預(yù)染蛋白Marker
預(yù)染蛋白Marker是一些純化好的蛋白混合物,通過與染料共價(jià)耦聯(lián),在電泳過程中或者轉(zhuǎn)膜時(shí)可以直接觀察到。預(yù)染蛋白分子量的出現(xiàn)方便了實(shí)驗(yàn),可以幫助我們?cè)陔娪緯r(shí)、電泳后以及轉(zhuǎn)膜后監(jiān)測(cè)電泳情況和估計(jì)遷移率。由于預(yù)染蛋白Marker是與染料共價(jià)耦聯(lián),所以在不同的緩沖條件下電泳時(shí)遷移特性可能會(huì)發(fā)生某些變化,可能導(dǎo)致一些偏差,所以不太適合定位蛋白。不過多數(shù)情況下Marker的條帶未必能和我們的目標(biāo)蛋白*一樣,我們得到的也不過是一種相對(duì)Marker指示的參考大小,zui后都需要Western來定性,所以如果不是要區(qū)分大小相近的條帶,預(yù)染Marker還是很好用的,而且也可以和未染色的蛋白標(biāo)準(zhǔn)一起使用。
預(yù)染蛋白標(biāo)準(zhǔn)可以分為兩種:單色預(yù)染和多色預(yù)染,如果用多色的彩虹Marker跑出來五顏六色的蛋白條帶,在比較沉悶的電泳實(shí)驗(yàn)中也能增添一抹亮色,此時(shí)在枯燥的實(shí)驗(yàn)過程中心情也會(huì)愉快一些吧!
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貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 原價(jià)/元 | */元 |
abs923 | Prestained Protein Ladder | 500ul | 1000.00 | 600.00 |
abs923-2.5ml | Prestained Protein Ladder | 5*500ul | 4000.00 | 2400.00 |
產(chǎn)品特色:
1. 使用方便:可在冷水或熱水中快速溶解,可直接上樣,無需加熱或者煮沸;
2. 與各種膜兼容:彩色條帶在WB中可轉(zhuǎn)移到膜上成像;
3. 更清晰,更易觀察;
4. 每批次均經(jīng)過SDS-PAGE和WB驗(yàn)證,質(zhì)量更有保證;
5. 足夠耐用:一只500ul至少跑100塊8*10cm膠;
6. 不易降解
愛必信特色產(chǎn)品線:
生化試劑(60萬種)、抗體(10萬種)、細(xì)胞因子、二抗、ECL發(fā)光液、蛋白marker、激動(dòng)劑、抑制劑、凋亡試劑盒、BSA、動(dòng)植物提取物、蛋白酶K、組化筆...
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