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多重?zé)晒饷庖呓M化染色是基于抗原、抗體特異性結(jié)合的原理,選用辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的二抗抗體,對(duì)試劑盒中的熒光染料進(jìn)行活化,將信號(hào)共價(jià)結(jié)合到抗原上。借助于不同的熒光染料標(biāo)記,通過(guò)多輪染色循環(huán)實(shí)現(xiàn)組織或細(xì)胞的原位多靶點(diǎn)染色。
檸檬酸鈉-EDTA抗原修復(fù)液(40×) (Citrate-EDTA Antigen Retrieval Solution(40×))采用了常用的檸檬酸鈉緩沖液和EDTA,結(jié)合了兩者修復(fù)抗原的優(yōu)點(diǎn),并經(jīng)過(guò)適當(dāng)優(yōu)化,可以更加有效地去除醛類固定試劑導(dǎo)致的蛋白之間的交聯(lián),充分暴露石蠟切片等樣品中的抗原表位,從而大大改善免疫染色效果。適用于石蠟切片、冰凍切片等樣品。
Tris-EDTA抗原修復(fù)液(10×,pH9.0)可以有效去除醛類固定試劑導(dǎo)致的蛋白之間的交聯(lián),充分暴露石蠟切片等樣品中的抗原表位,可以用于石蠟切片、冰凍切片等樣品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定后的抗原修復(fù)??乖迯?fù)可以提高石蠟切片的免疫染色效果,亦可以不同程度的提高冰凍切片的染色效果。
EDTA抗原修復(fù)液(50×)(EDTA Antigen Retrieval Solution (50×))采用了廣泛使用的EDTA,可以有效去除醛類固定試劑導(dǎo)致的蛋白之間的交聯(lián),充分暴露石蠟切片等樣品中的抗原表位,從而大大改善免疫染色效果。
Western一抗二抗去除液(弱堿性)使用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗體時(shí),封閉液必須使用5%脫脂奶粉配制。使用堿性磷酸酯酶標(biāo)記的抗體時(shí),封閉液必須使用酪蛋白(casein)配制。
Western一抗二抗去除液(中性)又稱膜再生液或Western抗體洗脫液(Stripping buffer),用于Western中轉(zhuǎn)移了蛋白的膜的重復(fù)利用。在Western中完成了一抗二抗結(jié)合和后續(xù)的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)后,有時(shí)還需要檢測(cè)GAPDH、β-actin等表達(dá)量相對(duì)穩(wěn)定的管家蛋白或其它蛋白作為參照。
免疫印跡及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液是在非變性環(huán)境內(nèi)裂解細(xì)胞的一款裂解液,主要成分為 20mM Tris-HCl(pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,以及焦磷酸鈉,β-甘油磷酸,正釩酸鈉,EDTA 和YI肽酶等多種抑制劑,可廣譜且有效抑制蛋白降解,并且維持原先蛋白間相互作用。
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