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多重熒光免疫組化染色是基于抗原、抗體特異性結(jié)合的原理,選用辣根過氧化物酶(HRP)標記的二抗抗體,對試劑盒中的熒光染料進行活化,將信號共價結(jié)合到抗原上。借助于不同的熒光染料標記,通過多輪染色循環(huán)實現(xiàn)組織或細胞的原位多靶點染色。
檸檬酸鈉-EDTA抗原修復液(40×) (Citrate-EDTA Antigen Retrieval Solution(40×))采用了常用的檸檬酸鈉緩沖液和EDTA,結(jié)合了兩者修復抗原的優(yōu)點,并經(jīng)過適當優(yōu)化,可以更加有效地去除醛類固定試劑導致的蛋白之間的交聯(lián),充分暴露石蠟切片等樣品中的抗原表位,從而大大改善免疫染色效果。適用于石蠟切片、冰凍切片等樣品。
Tris-EDTA抗原修復液(10×,pH9.0)可以有效去除醛類固定試劑導致的蛋白之間的交聯(lián),充分暴露石蠟切片等樣品中的抗原表位,可以用于石蠟切片、冰凍切片等樣品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定后的抗原修復??乖迯涂梢蕴岣呤炃衅拿庖呷旧Ч嗫梢圆煌潭鹊奶岣弑鶅銮衅娜旧Ч?。
EDTA抗原修復液(50×)(EDTA Antigen Retrieval Solution (50×))采用了廣泛使用的EDTA,可以有效去除醛類固定試劑導致的蛋白之間的交聯(lián),充分暴露石蠟切片等樣品中的抗原表位,從而大大改善免疫染色效果。
Western一抗二抗去除液(弱堿性)使用辣根過氧化物酶標記的抗體時,封閉液必須使用5%脫脂奶粉配制。使用堿性磷酸酯酶標記的抗體時,封閉液必須使用酪蛋白(casein)配制。
Western一抗二抗去除液(中性)又稱膜再生液或Western抗體洗脫液(Stripping buffer),用于Western中轉(zhuǎn)移了蛋白的膜的重復利用。在Western中完成了一抗二抗結(jié)合和后續(xù)的化學發(fā)光檢測后,有時還需要檢測GAPDH、β-actin等表達量相對穩(wěn)定的管家蛋白或其它蛋白作為參照。
免疫印跡及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液是在非變性環(huán)境內(nèi)裂解細胞的一款裂解液,主要成分為 20mM Tris-HCl(pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,以及焦磷酸鈉,β-甘油磷酸,正釩酸鈉,EDTA 和YI肽酶等多種抑制劑,可廣譜且有效抑制蛋白降解,并且維持原先蛋白間相互作用。
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