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Marker，染色及內(nèi)參等相關(guān)問(wèn)題Q：用的是預(yù)染marker，但是電泳總跑不全8條帶，請(qǐng)問(wèn)什么原因？怎樣改善？膠用過(guò)8％，10％，12％，都是這樣。marker是新買的。A：一般來(lái)說(shuō)，是小分子量Marker跑走了，可以增加膠濃度或減少電泳時(shí)間。梯度膠也是不錯(cuò)的選擇。（梯度凝膠愛(ài)必信就可提供呦）Q：WesternBlot哪種染色好？A：（1）陰離子染料是zui常用的，特別是氨基黑，脫色快，背景低檢測(cè)極限可達(dá)到1.5μg，考馬雖然與氨基黑有相同的靈敏度，但脫色慢，背景高。麗春紅S...

針對(duì)抗體常見(jiàn)問(wèn)題Q：做細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)，要做磷酸化某因子WesternBlot，其二抗有何要求？A：對(duì)二抗有無(wú)要求，要看你實(shí)驗(yàn)條件來(lái)選擇，一般推薦用HRP標(biāo)記的二抗。Q：免疫組化和WesternBlot可以用同一種抗體嗎？A：免疫組化時(shí)抗體識(shí)別的是未經(jīng)變性處理的抗原決定簇（又稱表位），有些表位是線性的，而有的屬于構(gòu)象型；線性表位不受蛋白變性的影響，天然蛋白和煮后的蛋白都含有；構(gòu)象型表位由于受蛋白空間結(jié)構(gòu)限制，煮后變性會(huì)消失。如果你所用的抗體識(shí)別的是蛋白上連續(xù)的幾個(gè)氨基酸，也就是線...

針對(duì)樣品的常見(jiàn)問(wèn)題：Q：細(xì)胞水平要做WesternBlot，多少細(xì)胞提的蛋白夠WesternBlot？A：一般地5*106就足夠了。Q:同一樣品能同時(shí)提RNA又提蛋白嗎，這樣對(duì)WesternBlot有無(wú)影響?A：能，沒(méi)有問(wèn)題的。Q:同一蛋白樣品能同時(shí)進(jìn)行兩種因子的WesternBlot檢測(cè)嗎？A：當(dāng)然可以，有的甚至可以同時(shí)測(cè)幾十種樣品。Q:如果目標(biāo)蛋白是膜蛋白或是胞漿蛋白，操作需要注意什么？A:如果是膜蛋白和胞漿蛋白，所用的去垢劑就要溫和得多，這時(shí)建議加上NaF去抑制磷酸化酶...

Western免疫印跡（WesternBlot）是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)已知表達(dá)蛋白，可用相應(yīng)抗體作為一抗進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)新基因的表達(dá)產(chǎn)物，可通過(guò)融合部分的抗體檢測(cè)。我們將通過(guò)以下幾個(gè)方面來(lái)詳細(xì)地介紹一下WesternBlot技術(shù)：【原理】與Southern或Northern雜交方法類似，但WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測(cè)物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過(guò)PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如PVDF膜）上...

預(yù)染蛋白marker是WesternBlot實(shí)驗(yàn)中常用的一種試劑，那么預(yù)染蛋白marker到底是什么？用的時(shí)候又有哪些注意事項(xiàng)呢？預(yù)染蛋白marker其實(shí)就是一些純化好的蛋白混合物，通過(guò)與染料共價(jià)耦聯(lián)，在電泳過(guò)程中或者轉(zhuǎn)膜時(shí)可以直接觀察到。預(yù)染蛋白marker的出現(xiàn)方便了我們的實(shí)驗(yàn)，可以幫助我們?cè)陔娪緯r(shí)、電泳后，以及轉(zhuǎn)膜后監(jiān)測(cè)電泳情況和估計(jì)遷移率。比如使用垂直電泳時(shí)*分辨區(qū)域大約在膠的2/3處，我們使用預(yù)染Marker就可以預(yù)測(cè)電泳的進(jìn)程。當(dāng)目標(biāo)蛋白進(jìn)入*分辨區(qū)時(shí)就可以停止電...

愛(ài)科研，必信它！科研百寶箱生化試劑領(lǐng)域?qū)＜?，?ài)必信(Absin®)重磅推出信號(hào)通路明星小分子抑制劑！作為愛(ài)必信生化試劑產(chǎn)品線的補(bǔ)充版，明星小分子抑制劑系列延續(xù)了愛(ài)必信質(zhì)量可靠，，產(chǎn)品全面的優(yōu)勢(shì)，實(shí)現(xiàn)了對(duì)愛(ài)必信生化試劑的有力補(bǔ)充，更好地滿足廣大科研工作者的需要。愛(ài)必信，以親和力的價(jià)格,豐富全面的產(chǎn)品線，快速的售后服務(wù)為用戶提供質(zhì)量可靠的小分子抑制劑！產(chǎn)品特點(diǎn)：☆質(zhì)量可靠，提供高純度的化合物！☆產(chǎn)品豐富全面，超過(guò)5000種抑制劑可供選擇！☆確保再次供應(yīng)！☆規(guī)格包裝靈活，可...

Forskolin在不與細(xì)胞表面受體相互作用前提下刺激腺苷酸環(huán)化酶活性。在脂肪細(xì)胞中Forskolin's促進(jìn)cAMP產(chǎn)生進(jìn)而可以抑制嗜堿性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞脫顆粒作用以及組胺釋放，降低血壓、眼內(nèi)壓，抑制血小板聚集，促進(jìn)血管舒張，支氣管擴(kuò)張和甲狀腺激素分泌，刺激脂肪分解。Forskolin抑制血小板活化因子(PAF)的結(jié)合,這種抑制不依賴于cAMP形成可能是Forskolin直接作用于PAF或者通過(guò)干擾PAF與它的受體結(jié)合實(shí)現(xiàn)的，似乎對(duì)多種膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白也有效果并且可以抑制脂肪細(xì)胞...

問(wèn)題一:陰性對(duì)照出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果可能的原因解決的方法試劑/樣品污染試劑和樣品可能被污染，或者由于孔之間的濺灑交叉污染。使用新鮮試劑，小心操作移液器夾心ELISA-檢測(cè)抗體與包被抗體反應(yīng)確定使用的是正確的包被抗體和檢測(cè)抗體，他們之間不會(huì)相互反應(yīng)酶標(biāo)板洗板不*用洗液充滿板空確保每孔被充分洗滌，洗板前確保所有的剩余抗體溶液被倒凈抗體量過(guò)多導(dǎo)致非特異性結(jié)合根據(jù)推薦用量使用抗體盡量使用較少的抗體問(wèn)題二：酶標(biāo)板整體背景高可能的原因解決的方法結(jié)合反應(yīng)太強(qiáng)或時(shí)間過(guò)長(zhǎng)檢查底物的稀釋，使用建議的稀釋...