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文獻(xiàn)信息

題目：Regulation of the migration of colorectal cancer stem cells via the TLR4/MyD88 signaling pathway by the novel surface marker CD14 following LPS stimulation

雜志：Oncology Letters 27.2 (2024): 60.

作者：Li Y, Shi J, Liu Z, et al

圖 文獻(xiàn)引用產(chǎn)品信息

研究背景

結(jié)直腸癌(CRC)是全球癌癥相關(guān)死亡的主要原因之一，主要原因與CRC干細(xì)胞(CCSCs)引起的術(shù)后癌癥復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移或癌細(xì)胞耐藥有關(guān)，CCSCs缺乏一致和可靠的標(biāo)記物限制了它們?cè)谂R床實(shí)踐中的使用。為了啟動(dòng)促炎反應(yīng)，脂多糖(LPS)和CD14（單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的一種特殊表面標(biāo)志物）通過(guò)Toll樣受體4(TLR4)信號(hào)通路相互作用，此外，脂多糖通過(guò)TLR4信號(hào)通路促進(jìn)結(jié)直腸癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)移，CD14與腫瘤的復(fù)發(fā)、生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和治療耐藥有關(guān)，這與CSC的特征（如復(fù)發(fā)、生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和耐藥）是一致的，這表明CD14可能與CCSCs相關(guān)。

研究方法

本研究采用免疫熒光雙標(biāo)記法檢測(cè)CD133和CD14，定量評(píng)估結(jié)直腸癌組織和癌旁組織石蠟包埋切片CCSCs中CD14的表達(dá)。隨后，從結(jié)直腸癌組織中提取CD14+細(xì)胞，通過(guò)分析增殖、腫瘤親和性和治療耐藥性來(lái)檢測(cè)其干性特征，以證實(shí)表型鑒定。此外，遷移的體外檢測(cè)能夠檢測(cè)CD14的功能。

研究結(jié)果

1、癌旁組織相比，所有結(jié)直腸癌組織中CD14和CD133共表達(dá)的陽(yáng)性率均顯著升高。

圖 CD14在CD133標(biāo)記的結(jié)直腸csc中表達(dá)

2、EdU和CCK-8檢測(cè)結(jié)果顯示結(jié)腸癌CD14+細(xì)胞表現(xiàn)出更強(qiáng)的增殖能力。

圖 結(jié)腸癌CD14+細(xì)胞表現(xiàn)出增強(qiáng)的增殖能力

（CCK-8購(gòu)自愛(ài)必信abs50003 CCK-8試劑盒）

3、細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)表明，與CD14-細(xì)胞相比，CD14+細(xì)胞更大，核分裂增加，聚集成簇。用裸鼠異種移植實(shí)驗(yàn)表明植入45天后，CD14+細(xì)胞組的腫瘤明顯大于CD14-細(xì)胞組。

圖 CD14+細(xì)胞在結(jié)腸癌中具有致瘤性

4、耐藥性分析。CD14+組和CD14-組細(xì)胞的IC50分別為2.554和17.02mg/L，表明與陰性組相比，陽(yáng)性組的耐藥性增加。

圖 CCK-8測(cè)定5-FU對(duì)CD14+和CD14-細(xì)胞48h的IC50效應(yīng)曲線

5、Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，內(nèi)毒素組表現(xiàn)出更強(qiáng)的遷移能力，而內(nèi)毒素+中和抗體組的遷移能力比對(duì)照組更強(qiáng)（圖A）。創(chuàng)面愈合實(shí)驗(yàn)表明，內(nèi)毒素組的細(xì)胞遷移能力明顯高于內(nèi)毒素+中和抗體組（圖B）。RT-qPCR結(jié)果顯示MyD88基因表達(dá)水平以?xún)?nèi)毒素組最高（圖C），Western blotting顯示TLR4和MyD88蛋白的表達(dá)在內(nèi)毒素+中和抗體組和內(nèi)毒素組均顯著高于對(duì)照組，其中內(nèi)毒素組的增加更明顯（圖D）。

圖 內(nèi)毒素影響細(xì)胞遷移

（RIPA裂解液abs9229、彩色PAGE快速凝膠試劑盒(10%)abs9367、ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒abs920、 TLR4抗體abs132000、MyD88抗體abs135682、LPSabs47014848, 細(xì)胞快速RNA提取試劑盒 abs60027）

常規(guī)裂解液對(duì)比

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