線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-1)

簡(jiǎn)要描述：線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒（JC-1）是一種以JC-1為熒光探針，快速靈敏地檢測(cè)細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位變化的試劑盒，可以用于早期的細(xì)胞凋亡檢測(cè)。

產(chǎn)品型號(hào)：abs50016
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
更新時(shí)間：2024-07-09
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細(xì)胞生物學(xué)

重組蛋白原代細(xì)胞分離細(xì)胞培養(yǎng) 細(xì)胞檢測(cè) 細(xì)胞/組織處理外泌體研究其它動(dòng)物血清 3D/類器官培養(yǎng)

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詳細(xì)介紹

品牌	absin	貨號(hào)	abs50016
規(guī)格	100T	供貨周期	現(xiàn)貨
應(yīng)用領(lǐng)域	化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥

描述：

線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒（JC-1）是一種以JC-1為熒光探針，快速靈敏地檢測(cè)細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位變化的試劑盒，可以用于早期的細(xì)胞凋亡檢測(cè)。JC-1是一種廣泛用于檢測(cè)線粒體膜電位△Ψm的理想熒光探針?？梢詸z測(cè)細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位。在線粒體膜電位較高時(shí)，JC-1聚集在線粒體的基質(zhì)中，形成聚合物，可以產(chǎn)生紅色熒光；在線粒體膜電位較低時(shí)，JC-1不能聚集在線粒體的基質(zhì)中，此時(shí)JC-1為單體，可以產(chǎn)生綠色熒光。這樣就可以非常方便地通過(guò)熒光顏色的轉(zhuǎn)變來(lái)檢測(cè)線粒體膜電位的變化。常用紅綠熒光的相對(duì)比例來(lái)衡量線粒體去極化的比例。

線粒體膜電位的下降是細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)標(biāo)志性事件。通過(guò)JC-1從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變可以很容易地檢測(cè)到細(xì)胞膜電位的下降，同時(shí)也可以用JC-1從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變作為細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)檢測(cè)指標(biāo)。JC-1單體的最大激發(fā)波長(zhǎng)為515nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為529nm；JC-1聚合物的最大激發(fā)波長(zhǎng)為585nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為590nm。實(shí)際觀察時(shí)，使用常規(guī)的觀察紅色熒光和綠色熒光的設(shè)置即可。本試劑盒提供了CCCP作為誘導(dǎo)線粒體膜電位下降的陽(yáng)性對(duì)照。對(duì)于六孔板中的樣品，本試劑盒共可以檢測(cè)100個(gè)樣品；對(duì)于12孔中的樣品，本試劑盒共可以檢測(cè)200個(gè)樣品。

使用方法：

1、JC-1染色工作液的配制
六孔板每孔所需JC-1染色工作液的量為1mL，其他培養(yǎng)器皿的JC-1染色工作液的用量以此類推：對(duì)于細(xì)胞懸液每50～100萬(wàn)細(xì)胞需0.5mLJC-1染色工作液。取適量JC-1（200×），按照每50μLJC-1（200×）加入8mL超純水的比例稀釋JC-1。劇烈震蕩充分溶解并混勻JC-1。然后再加入2mLJC-1染色緩沖液（5×），混勻后即為JC-1染色工作液。

2、陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置：
把試劑盒中提供的CCCP（10mM）推薦按照1∶1000的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，稀釋至10μM，處理細(xì)胞20分鐘。隨后按照下述方法裝載JC-1，進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞，通常10μMCCCP處理20分鐘后線粒體的膜電位會(huì)喪失，JC-1染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光；而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞，CCCP的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同，需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。

3、對(duì)于懸浮細(xì)胞
取10～60萬(wàn)細(xì)胞，重懸于0.5mL細(xì)胞培養(yǎng)液中，細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
加入0.5mLJC-1染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中37℃孵育20分鐘。
在孵育期間，按照每1mLJC-1染色緩沖液（5×）加入4mL蒸餾水的比例，配制適量的JC-1染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
37℃孵育結(jié)束后，600g4℃離心3～4分鐘，沉淀細(xì)胞。棄上清，注意盡量不要吸除細(xì)胞。
用JC-1染色緩沖液（1×）洗滌2次：加入1mLJC-1染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g4℃離心3～4分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。
再加入1mLJC-1染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g4℃離心3～4分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。再用適量JC-1染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。

4、對(duì)于貼壁細(xì)胞
注意：對(duì)于貼壁細(xì)胞，如果希望采用熒光分光光度計(jì)或流式細(xì)胞儀檢測(cè)，可以先收集細(xì)胞，重懸后參考懸浮細(xì)胞的檢測(cè)方法。
對(duì)于六孔板的一個(gè)孔，吸除培養(yǎng)液，根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)如有必要可以用PBS或其它適當(dāng)溶液洗滌細(xì)胞一次，加入1mL細(xì)胞培養(yǎng)液。細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含有血清和酚紅。加入1mLJC-1染色工作液，充分混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中37℃孵育20分鐘。
在孵育期間，按照每1mLJC-1染色緩沖液（5×）加入4mL蒸餾水的比例，配制適量的JC-1染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
37℃孵育結(jié)束后，吸除上清，用JC-1染色緩沖液（1×）洗滌2次。
加入2mL細(xì)胞培養(yǎng)液，培養(yǎng)液中可以含有血清和酚紅。
熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡下觀察。

5、對(duì)于純化的線粒體
把配制好的JC-1染色工作液再用JC-1染色緩沖液（1×）稀釋5倍。
0.9mL5倍稀釋的JC-1染色工作液中加入0.1mL總蛋白量為10～100μg純化的線粒體。用熒光分光光度計(jì)或熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)：混勻后直接用熒光分光光度計(jì)進(jìn)行時(shí)間掃描（timescan），激發(fā)波長(zhǎng)為485nm，發(fā)射波長(zhǎng)為590nm。如果使用熒光酶標(biāo)儀，激發(fā)波長(zhǎng)不能設(shè)置為485nm時(shí)，可以在475～520nm范圍內(nèi)設(shè)置激發(fā)波長(zhǎng)。另外，也可以參考下面步驟6中的波長(zhǎng)設(shè)置進(jìn)行熒光檢測(cè)。
用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察：方法同下面的步驟6。

6、熒光觀測(cè)和結(jié)果分析檢測(cè)
JC-1單體時(shí)可以把激發(fā)光設(shè)置為490nm，發(fā)射光設(shè)置為530nm；檢測(cè)JC-1聚合物時(shí)，可以把激發(fā)光設(shè)置為525nm，發(fā)射光設(shè)置為590nm。注意：此處測(cè)定熒光時(shí)不必把激發(fā)光和發(fā)射光設(shè)置在最大激發(fā)波長(zhǎng)和最大發(fā)射波長(zhǎng)。如使用熒光顯微鏡觀察，檢測(cè)JC-1單體時(shí)可以參考觀察其它綠色熒光時(shí)的設(shè)置，如觀察GFP或FITC時(shí)的設(shè)置；檢測(cè)JC-1聚合物時(shí)可以參考觀察其它紅色熒光，如碘化丙啶或Cy3時(shí)的設(shè)置。出現(xiàn)綠色熒光說(shuō)明線粒體膜電位下降，并且該細(xì)胞很可能處于細(xì)胞凋亡早期。出現(xiàn)紅色熒光說(shuō)明線粒體膜電位比較正常，細(xì)胞的狀態(tài)也比較正常。

注意事項(xiàng)：

1、JC-1（200×）在4℃、冰浴等較低溫度情況下會(huì)凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi)，可以20～25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
2、必須先把JC-1（200×）用試劑盒提供的超純水充分溶解混勻后，才可以加入JC-1染色緩沖液（5×）。不可先配制JC-1染色緩沖液（1×）再加入JC-1（200×），這樣JC-1會(huì)很難充分溶解，會(huì)嚴(yán)重影響后續(xù)的檢測(cè)。
3、裝載完JC-1后用JC-1染色緩沖液（1×）洗滌時(shí)，使JC-1染色緩沖液（1×）保持4℃左右，此時(shí)的洗滌效果較好。
4、JC-1探針裝載完并洗滌后盡量在30分鐘內(nèi)完成后續(xù)檢測(cè)。在檢測(cè)前需冰浴保存。
5、請(qǐng)勿把JC-1染色緩沖液（5×）全部配制成JC-1染色緩沖液（1×），本試劑盒使用過(guò)程中需直接使用JC-1染色緩沖液（5×）。
6、如果發(fā)現(xiàn)JC-1染色緩沖液（5×）中有沉淀，必須全部溶解后才能使用，為促進(jìn)溶解可以在37℃加熱。
7、CCCP為線粒體電子傳遞鏈抑制劑，有毒，請(qǐng)注意小心防護(hù)。
8、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

產(chǎn)品引用文獻(xiàn)：

Cold atmospheric plasma fumigation suppresses postharvest apple Botrytis cinerea by triggering intracellular reactive oxygen species and mitochondrial calcium

Jiankang Cao, Qiong Fang, Chenrui Han, Chongshan Zhong

INTERNATIONAL JOURNAL OF FOOD MICROBIOLOGY. 2023 Sep 11 .

影響因子： 5.4

SNORC knockdown alleviates inflammation, autophagy defect and matrix degradation of chondrocytes in osteoarthritis development

Tang Zhifang, Feng Hanzhen, Chen Xusheng, Shao Shuiyan, Li Chuan

MOLECULAR AND CELLULAR BIOCHEMISTRY. 2023 Sep 02 .

影響因子： 4.3

Water Extract of Rice False Smut Balls Activates Nrf2/HO-1 and Apoptosis Pathways, Causing Liver Injury

Zhang Guomei, Li Han, Liu Shanshan, Zhou Xuming, Lu Mingyang, Tang Liang, Sun Lihua

Rice Science. 2023 Aug 23 .