描述：

MTT法又稱MTT比色法，是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀 酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(Formazan)并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。在一定細胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT 結晶形成的量與細胞數(shù)成正比，吸光度越大，表示細胞活性越強，說明藥物毒性越小。該方法已廣泛用于一些生物活性因子 的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經(jīng)濟。

組分：MTT（25mg）、MTT 溶劑（5ml）、Formazan 溶解液（55ml）

使用方法：

1、將細胞板放置于無菌操作臺中。 

2、在細胞板中每孔加入10%體積的 MTT溶溶劑。 

MTT溶液的配制：用5ml MTT溶劑溶解25mg MTT，配制成5mg/ml的MTT溶液。配制后即可使用，或直接-20℃避光保存，也可以根據(jù)需要適當分裝后-20℃避光保存。

3、將細胞板放回培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育3-4h。做對比試驗時，孵育時間需一致。 

4、孵育后將細胞板從培養(yǎng)箱中拿出，按照下面的方法溶解產(chǎn)生MTT甲臜結晶物。 

1）如果是貼壁細胞，則棄去培養(yǎng)基。加入與初始體積等量的Formazan Solvent。每孔的溶解液體積可能不同，但為了方便比較，總體積須保持一致。 

2）如是非貼壁細胞或培養(yǎng)基的去除會造成MTT甲臜丟失，則直接在培養(yǎng)基中加入與初始體積等量的溶解 液。 

3）加入Formazan Solvent 后，須在1h內(nèi)完成讀數(shù)。 

5、在搖床中溫和地振蕩可增強溶解。某些情況下，尤其是細胞密度較高時，需要反復吹打使 MTT 甲臜結晶物溶解。 

6、分光光度計測定OD570和參考波長OD690。 

7、96 孔板可以在配備合適濾光片的酶標儀上進行檢測。 

8、其他類型的多孔板則需用合適大小的比色皿或讀板器進行分光光度檢測。

注意事項：

1、由于使用96孔板進行檢測，如果細胞培養(yǎng)時間較長，一定要注意蒸發(fā)的問題。一方面，由于96孔板周圍一圈最容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加PBS，水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，以緩解蒸發(fā)。

2、若所用受試化合物與MTT能夠反應，可先離心后棄去培養(yǎng)液，小心用PBS沖2~3遍后，再加入含MTT的培養(yǎng)液。 

3、Formazan的生成不僅與活細胞數(shù)成正比，也受作用時間的影響，因此樣品較多時測定的結果可能隨時間而變。 

4、本品含有致癌物質(zhì)，避免與皮膚和眼睛接觸，請小心操作。為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。 

5、本產(chǎn)品只用于科研，不可應用于臨床或診斷。

產(chǎn)品引用文獻：

SPI1 Mediates N-Myristoyltransferase 1 to Advance Gastric Cancer Progression via PI3K/AKT/mTOR Pathway

Ping Qiu, Xing Li, Min Gong, Ping Wen, Jianbo Wen, Linfang Xu, Guiliang Wang

Canadian Journal of Gastroenterology and Hepatology. 2023 Mar 17 .

影響因子： 2.605

Long noncoding RNA MEG3 suppresses cell proliferation, migration and invasion, induces apoptosis and paclitaxel-resistance via miR-4513/PBLD axis in breast cancer cells

Mingzhi Zhu,Fang Wang,Hailong Mi,Lin Li,Jing Wang,Mingli Han,Yuanting Gu

Cell Cycle. 2020 Oct 30 .

影響因子： 3.699