※ 如何理解文獻(xiàn)中的結(jié)果？

各名稱(chēng)解析：

IB：全稱(chēng)immunoblotting，即免疫印跡，也就是常規(guī)的Western Blotting，用于顯示目的蛋白。

IP：全稱(chēng)immunoprecipitation，即免疫沉淀，這一步主要是為了純化富集目的蛋白。

Input：全細(xì)胞裂解液，含有細(xì)胞內(nèi)所有的蛋白，可認(rèn)為是陽(yáng)性組。也就是處理完樣本得到的細(xì)胞裂解液，在做IP實(shí)驗(yàn)之前，需要先跑WB，確認(rèn)樣本中含有蛋白A和蛋白B。

Anti-A：A蛋白的免疫共沉淀抗體

IgG：Anti-A的同型對(duì)照抗體，即跟Anti-A同來(lái)源同種型，如Anti-A是兔來(lái)源IgG型，則同型對(duì)照抗體需要選擇Rabbit IgG（abs20035）

結(jié)果圖解析：

該結(jié)果是為驗(yàn)證蛋白A與蛋白B是否存在相互作用。本實(shí)驗(yàn)一共分為兩大組：Input組及IP組，其中IP組又分為IgG組（陰性對(duì)照組）和實(shí)驗(yàn)組，并通過(guò)WB去驗(yàn)證蛋白A和B在每一個(gè)組里面是否存在。由Input組的條帶可以得到結(jié)論：蛋白A與蛋白B都是存在的，證明樣本處理提取蛋白的步驟沒(méi)有任何問(wèn)題。陰性對(duì)照IgG組和實(shí)驗(yàn)組平行進(jìn)行免疫沉淀實(shí)驗(yàn)，結(jié)果蛋白A與蛋白B均沒(méi)有條帶，說(shuō)明利用IgG抗體沒(méi)有把蛋白A和B沉淀下來(lái)，證明蛋白A和B與IgG沒(méi)有結(jié)合，排除了蛋白與抗體非特異性結(jié)合的可能性；而實(shí)驗(yàn)組蛋白A和B均有條帶，表示利用蛋白A的抗體進(jìn)行沉淀實(shí)驗(yàn)，成功把蛋白A沉淀下來(lái)了，與此同時(shí)蛋白B也被沉淀下來(lái)，進(jìn)而得到結(jié)論：蛋白A與蛋白B之間存在相互作用。

確切來(lái)說(shuō)，試劑盒的50T代表著能夠完成50次免疫沉淀反應(yīng)，而實(shí)際上免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)需要設(shè)置多個(gè)組別進(jìn)行對(duì)照驗(yàn)證，因此具體能夠完成多少次Co-IP實(shí)驗(yàn)由設(shè)計(jì)方案決定，一般至少需要設(shè)置陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、實(shí)驗(yàn)組三個(gè)組別。

這個(gè)步驟的目的是為去除樣本中可與protein A/G瓊脂糖珠非特異結(jié)合的蛋白質(zhì)，減少干擾，非必做，如CoIP實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)有較多雜帶，可考慮做一下；但應(yīng)注意，選擇此步驟后，需要消耗瓊脂糖珠，后續(xù)能夠進(jìn)行免疫沉淀的次數(shù)也相應(yīng)減少。

對(duì)于內(nèi)源性Co-IP實(shí)驗(yàn)，陰性結(jié)果不能說(shuō)明無(wú)相互作用，也有可能是蛋白在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)過(guò)低導(dǎo)致，因此建議先做過(guò)表達(dá)Co-IP作為對(duì)照。