裂解法包括化學(xué)裂解、酶裂解和機(jī)械裂解.化學(xué)裂解和酶裂解通常是比較溫和的方法,通常會(huì)很少使DNA 斷裂。
化學(xué)裂解和酶裂解法主要是裂解液處理法,主要根據(jù)不同的目的,裂解液的組成有所不同,主要有提取核酸和蛋白兩中.在提取RNA或DNA時(shí),我們主要是要充分裂解細(xì)胞,得到更多的核酸;如果我們的目的是蛋白,那要根據(jù)蛋白的位置、特性等因素考慮裂解液。
蛋白定位 | 裂解液種類 |
全細(xì)胞 | NP-40 或RIPA |
細(xì)胞質(zhì)(可溶性蛋白) | Tris-HCL |
細(xì)胞質(zhì)(細(xì)胞骨架等不溶性蛋白) | Tris-Triton |
細(xì)胞膜 | NP-40 或RIPA |
細(xì)胞核 | RIPA |
線粒體 | RIPA |
1、去垢劑
SDS,NP-40,TritonX-100這三種去垢劑的作用強(qiáng)弱是不同的。
SDS屬于離子型去垢劑,厲害,基本可以把細(xì)胞*破掉,DNA會(huì)釋放出來,裂解液變得很粘稠。
NP-40是很溫和的去垢劑,1%濃度的基本可以破壞掉胞膜,而對(duì)核膜破壞的作用弱,結(jié)合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白。
TritonX-100的能力介于NP40和SDS 之間,偏向于NP40,也是常用的細(xì)胞裂解液成分之一,在保護(hù)蛋白活性方面有一定作用(SDS基本會(huì)使蛋白變性失活)。
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
abs9160 | NP-40裂解液 | 100ml |
abs9117 | SDS裂解液 | 100ml |
abs9149 | Triton X-100 | 100ml/500ml |
2、RIPA裂解液
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer),是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液,對(duì)組織和細(xì)胞都有較好的裂解作用,主要是從動(dòng)物組織和動(dòng)物細(xì)胞中抽取的可溶性蛋白。RIPA的配方有很多種,根據(jù)其裂解強(qiáng)度的不同,大致可分為強(qiáng)、中、弱三類,應(yīng)用上會(huì)有一些差異。
產(chǎn)品貨號(hào) | abs9229 | abs9231 | abs9228 | abs9230 |
產(chǎn)品名稱 | RIPA裂解液(強(qiáng)) | RIPA裂解液(強(qiáng))(不含抑制劑) | RIPA裂解液(中) | RIPA裂解液(弱) |
有效成分 | 1% Triton X-100,1%脫氧膽酸鈉,0.1% SDS | 1% Triton X-100,1%脫氧膽酸鈉,0.1% SDS | 1% NP-40,0.5%脫氧膽酸鈉,0.1% SDS | 1% NP-40,0.25%脫氧膽酸鈉 |
裂解強(qiáng)度 | 強(qiáng) | 強(qiáng) | 中 | 溫和 |
對(duì)膜蛋白的提取 | 優(yōu) | 優(yōu) | 良好 | 一般 |
對(duì)胞漿蛋白的提取 | 優(yōu) | 優(yōu) | 優(yōu) | 優(yōu) |
對(duì)核蛋白的提取 | 優(yōu) | 優(yōu) | 良好 | 較好 |
胞漿磷酸化蛋白的提取 | 優(yōu) | 優(yōu) | 優(yōu) | 優(yōu) |
核轉(zhuǎn)錄因子的提取 | 優(yōu) | 優(yōu) | 優(yōu) | 優(yōu) |
蛋白酶抑制劑 | 含有 | 不含 | 含有 | 含有 |
磷酸酶抑制劑 | 含有 | 不含 | 含有 | 含有 |
主要用途 | WB,IP | WB,IP | WB,IP | WB,IP,Co-IP |
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
abs9228 | RIPA裂解液(中) | 100ml |
abs9230 | RIPA裂解液(弱) | 100ml |
abs9229 | RIPA裂解液(強(qiáng)) | 100ml |
abs9231 | RIPA裂解液(強(qiáng))(不含蛋白酶/磷酸酶抑制劑) | 100ml |
3、紅細(xì)胞裂解液
紅細(xì)胞裂解液是一種去除紅細(xì)胞簡(jiǎn)便易行的方法,即用裂解液裂解紅細(xì)胞,利用細(xì)胞內(nèi)外存在鹽離子濃度差而導(dǎo)致細(xì)胞膜脹破的原理來裂解無核紅細(xì)胞的,既不損傷有核細(xì)胞又能充分的去除紅細(xì)胞。主要用于經(jīng)酶消化分散的組織細(xì)胞的分離純化,淋巴細(xì)胞的分離純化以及組織細(xì)胞蛋白與核酸提取等實(shí)驗(yàn)中紅細(xì)胞的去除。
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
abs9101 | 紅細(xì)胞裂解液 | 100ml/500ml |
abs9241 | 紅細(xì)胞裂解液,10X | 100ml |
abs9225 | 組織/細(xì)胞裂解液 (多因子檢測(cè)) | 100ml/500ml |
4、WB/IP 裂解液
免疫印跡及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液(Lysis Buffer for WB/IP Assays)是在非變性環(huán)境內(nèi)裂解細(xì)胞的一款裂解液,適用于 PAGE,蛋白免疫印跡(Western Blot),免疫沉淀(IP),免疫共沉淀,ELISA 等實(shí)驗(yàn)。經(jīng)本品裂解收集的蛋白樣品,可使用增強(qiáng)型 BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定總蛋白濃度。由于本品含有較高濃度的去垢劑等干擾物質(zhì),不適合用 Bradford法來測(cè)定總蛋白濃度。
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
abs9116 | 免疫印跡及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液 | 100ml |
abs9239 | 免疫印跡及免疫沉淀用裂解液(不含蛋白酶/磷酸酶抑制劑) | 100ml |
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