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Trizol

簡要描述:它是細(xì)胞或組織總RNA抽提試劑。本產(chǎn)品采用和Invitrogen公司的Trizol*相似的原理和方法,抽提的方法和步驟*相同。

  • 產(chǎn)品型號:abs60154
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2024-08-08
  • 訪  問  量:1460

詳細(xì)介紹

品牌absin貨號abs60154
規(guī)格100mL;100mL×2;500mL供貨周期現(xiàn)貨
應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥,綜合
產(chǎn)品描述
描述
Trizol是細(xì)胞或組織總RNA抽提試劑。本產(chǎn)品采用和Invitrogen公司的TRIzol完quan相似的原理和方法,抽提的方法和步驟wan全相同。
Trizol的顏色和TRIzol相同,加入氯仿后上層呈無色,下層呈紅色,便于吸取上層水相。
Trizol對動植物細(xì)胞或組織及細(xì)菌的總RNA抽提均適用。
Trizol抽提所得RNA無DNA和蛋白污染。一般所得RNA溶于DEPC水后的A260/280值為1.8-2.0。
裂解細(xì)胞或和組織共勻漿時,Trizol可以保持樣品中RNA的完整性,即可以有效抑制RNA的降解。
每一百萬細(xì)胞用Trizol抽提可得5-15μg RNA;每毫克組織用Trizol抽提可得1-10μg RNA。產(chǎn)量因細(xì)胞和組織不同而異。
Trizol抽提所得RNA可直接用于Northern,點(diǎn)雜交,純化mRNA,體外翻譯,RNase protectionassay,cDNA克隆,以及RTPCR;也可以用于基因表達(dá)芯片分析、高通量測序等對RNA質(zhì)量要求較高的情況。
使用方法
1、細(xì)胞裂解:
   組織樣本: Trizol用量:每 50-100 mg 組織加 1 ml Trizol,樣品體積不應(yīng)超過 Trizol 體積的 10%。
(1)將動物或植物組織切成小塊,在液氮中磨碎或用勻漿器勻漿處理。
(2)將研磨好的組織粉末快速轉(zhuǎn)入裝有 1 ml Trizol 的 2 ml 離心管中,在渦旋振蕩器上迅速振蕩混勻,置于冰上, 待所有的樣品研磨完。
(3)裂解產(chǎn)物應(yīng)呈澄清的透明粘稠液體。對于富含蛋白、脂肪或多糖物質(zhì)的組織樣品如肌肉、脂肪組織和植物結(jié)節(jié)部位等,勻漿后仍會存留有不溶物質(zhì),可于 4℃ 12,000 x g 離心 10 min,然后吸取上清至一新的離心管中。
  細(xì)胞樣本:
(1)貼壁細(xì)胞:吸盡培養(yǎng)液,每10cm2培養(yǎng)面積(6孔板單孔或35mm平皿)加入1ml Trizol,用加樣器吹打數(shù)次,以確保細(xì)胞完quan裂解,然后轉(zhuǎn)移至離心管中。 注:Trizol的使用量應(yīng)由培養(yǎng)皿表面 積決定,而非由細(xì)胞數(shù)目決定。Trizol量不足可能導(dǎo)致提取的RNA中有DNA污染 。
(2)懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,吸盡液體,每 5-10×106動植物或酵母細(xì)胞,或每 1×107細(xì)菌細(xì)胞加入 1ml Trizol, 用加樣器吹打,使其完quan裂解,然后轉(zhuǎn)移至離心管中。 注:添加 Trizol 前切勿洗滌細(xì)胞 ,以免 RNA 降解。必要時可以用勻漿器來裂解某些細(xì)菌或者酵母細(xì)胞 。
2、液相分離:
(1)裂解產(chǎn)物于室溫放置5min,使核酸-蛋白復(fù)合物完quan分離。(注:此時樣品可在-80℃長期保存。 )
(2)每1ml Trizol 加入0.2ml 氯仿,蓋緊管蓋,劇烈振蕩15s,室溫放置2-3min。
(3)4℃ 12,000 x g 離心15min,樣品會分成三層:桔黃色的下層有機(jī)相,中間層和無色的上層水相。
(4)吸取含總 RNA 的上層水相至一新的離心管中,吸取水相的體積為所用 Trizol 試劑的 60%。
3、RNA 回收
(1)按照每 1 ml Trizol 的最初使用量加入 0.5 ml 異丙醇,顛倒數(shù)次混勻,室溫放置 10 min。
(2) 4℃ 12,000 x g 離心 10 min,棄除上清,可見膠狀的 RNA 沉淀。
(3)按照每 1 ml Trizol 的最初使用量加入 1 ml 75%乙醇,顛倒數(shù)次混勻,洗滌沉淀。
(4)4℃ 12,000 x g 離心 5 min,棄除上清。
(5)室溫倒置 5-10 min 晾干或真空抽干(不要使用真空干燥離心機(jī),以免 RNA 過干,難以溶解)。
(6)加入適量(如 25ul) DEPC-ddH2O 或 TE 緩沖液,用加樣器吹打數(shù)次溶解 RNA。
(7)通過 RNA 電泳以及紫外分光光度計檢測,確定 RNA 的濃度、純度和完整性。
(8)所得的 RNA 應(yīng)立即使用或適量分裝后-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
儲存/保存方法
4℃避光密閉保存,保質(zhì)期12個月。
注意事項(xiàng)
1、如果需要測量 RNA 的 A260/A280 的比值,建議使用 RNA 定量緩沖液對樣品稀釋后,進(jìn)行測量。
2、所有離心管,槍頭及相關(guān)溶液都必須無 RNA 酶污染。耐高溫器物可 180℃烘烤 4 小時以去除RNA 酶,其它器物去除 RNA 酶可考慮用 0.01%的 DEPC 水浸泡過夜,然后滅菌,烘干。溶液需用 DEPC 水配制。加 0.01% DEPC 至重蒸水或 MiliQ 級水中,處理過夜,滅菌即成 DEPC 水。
3、使用凍存的細(xì)胞或組織抽提總 RNA 的效果通常比新鮮的細(xì)胞或組織差一些。因?yàn)樵诩?xì)胞或組織凍融過程中一些細(xì)胞或組織內(nèi)的 RNase 會被釋放出來并剪切樣品。如果不能及時抽 RNA, 推薦先加入適量 Trizol,并裂解樣品后凍存。
4、必須戴一次性手套操作,且盡量不要對著 RNA 樣品呼氣或說話,以防 RNA 酶污染。建議戴一次性口罩操作。
5、避免接觸皮膚或吸入。為防止濺入眼睛,請戴防護(hù)眼鏡或使用透明保護(hù)屏。如皮膚接觸 Trizol,請立即用大量去垢劑和水沖洗,如仍有不適,請聽取醫(yī)生意見。
6、為了您的自身安全,使用試劑前,請做好防護(hù),如穿實(shí)驗(yàn)服,帶手套等。
基本信息
別名
總RNA提取試劑(Trizol試劑)

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