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HRP酶標(biāo)二抗和熒光二抗有什么區(qū)別?分別在什么時候用?

更新時間:2024-09-20      點擊次數(shù):544

在生物學(xué)實驗中,二抗的選擇至關(guān)重要。其中,HRP酶標(biāo)二抗和熒光二抗是兩種常見的二抗類型,它們各具特色,并在不同的實驗場景下發(fā)揮著關(guān)鍵作用。

 

一、HRP酶標(biāo)二抗

 

1. 定義及特性

HRP酶標(biāo)二抗,即辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP)標(biāo)記的二抗,是生物學(xué)實驗常規(guī)用的二抗。其特點包括比活性高、穩(wěn)定性好、分子量小、純酶容易制備等,因此在免疫學(xué)實驗中廣泛應(yīng)用。

 

2. 應(yīng)用場景

HRP酶標(biāo)二抗常用于如免疫印跡(WB)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)以及免疫組織化學(xué)(IHC)等實驗。在這些實驗中,HRP標(biāo)記的二抗與底物反應(yīng),產(chǎn)生可檢測的化學(xué)發(fā)光信號,從而實現(xiàn)目標(biāo)蛋白的檢測。例如,在WB實驗中,HRP酶標(biāo)二抗能夠檢測樣品中的特定蛋白,并通過ECL試劑顯色,使信號可視化。

 

 

HRP在不同實驗中對應(yīng)的底物及檢測原理和方法


實驗

底物

檢測原理和方法

WB

Luminol和H2O2

魯米諾在堿性條件下與過氧化氫(H2O2)反應(yīng),在辣根過氧化物酶(HRP)的催化下產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號,可用CCD凝膠成像儀進(jìn)行檢測。

Elisa

TMB

在HRP的作用下,TMB被氧化并產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物,隨后在強酸條件下變?yōu)辄S色。使用酶標(biāo)儀在450nm波長下進(jìn)行檢測。

HIC

DAB

DAB常用于組織化學(xué)和免疫組化實驗,與HRP反應(yīng)后形成不溶性棕色沉淀物,可以使用光學(xué)顯微鏡檢測。




 

二、熒光二抗

 

1. 定義及特性

熒光二抗,即帶有熒光基團(tuán)的二抗,能夠在激發(fā)光下發(fā)出熒光信號。常用的熒光基團(tuán)包括Cy3、Cy5、Alexa Fluor等。這些熒光基團(tuán)具有不同的激發(fā)和發(fā)射波長,可以實現(xiàn)多標(biāo)染色實驗中的不同顏色標(biāo)記。

 

2. 應(yīng)用場景

熒光二抗廣泛應(yīng)用于免疫熒光(IF)、免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)以及流式細(xì)胞儀(Flow cytometry)等實驗。在這些實驗中,熒光二抗與目標(biāo)蛋白結(jié)合后,通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀等設(shè)備檢測熒光信號,從而實現(xiàn)目標(biāo)蛋白的定位和定量。例如,在IF實驗中,熒光二抗可以標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)的特定蛋白,并通過熒光顯微鏡觀察其在細(xì)胞內(nèi)的分布和表達(dá)情況。

 

3. 多標(biāo)染色實驗

熒光二抗在多標(biāo)染色實驗中具有特殊優(yōu)勢。通過選擇不同激發(fā)和發(fā)射波長的熒光基團(tuán),可以實現(xiàn)多種目標(biāo)蛋白的同時檢測。例如,可以使用Alexa Fluor 488和Alexa Fluor 594兩種熒光基團(tuán)分別標(biāo)記兩種不同的目標(biāo)蛋白,并通過熒光顯微鏡同時觀察它們在細(xì)胞內(nèi)的分布和表達(dá)情況。

 

 

三、酶標(biāo)二抗和熒光二抗的對比

 

HRP酶標(biāo)二抗和熒光二抗各具特色,分別在不同的實驗場景下發(fā)揮關(guān)鍵作用。HRP酶標(biāo)二抗以其高靈敏度和穩(wěn)定性在WB、ELISA和IHC等實驗中廣泛應(yīng)用;而熒光二抗則以其特殊的熒光信號和多標(biāo)染色能力在IF、ICC和流式細(xì)胞儀等實驗中展現(xiàn)出特殊優(yōu)勢。在實驗中,應(yīng)根據(jù)具體需求和實驗條件選擇合適的二抗類型,以提高實驗的準(zhǔn)確性和可靠性。

 


 

HRP酶標(biāo)二抗

熒光二抗

定義

辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的二抗

帶有熒光基團(tuán)的二抗

特性

催化底物產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號

在激發(fā)光下發(fā)出熒光信號

應(yīng)用場景

免疫印跡(WB)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、免疫組織化學(xué)(IHC)等

免疫熒光(IF)、免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)、流式細(xì)胞儀(Flow cytometry)等

靈敏度

高,可挑戰(zhàn)fg級別

中等至高,取決于熒光基團(tuán)和檢測設(shè)備

多標(biāo)染色

不適用于多標(biāo)染色

適用于多標(biāo)染色,可同時檢測多種目標(biāo)蛋白

信號穩(wěn)定性

相對穩(wěn)定,不易受外界因素影響

對光敏感,需避免長時間暴露于強光下

可視化方法

化學(xué)發(fā)光成像(如ECL試劑顯色)

熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測

操作簡便性

操作相對簡單,但可能涉及化學(xué)發(fā)光底物的處理

操作簡便,直接通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀觀察

成本

相對較低(基于常規(guī)生化試劑)

可能較高,尤其是高級熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀的使用

優(yōu)點

高靈敏度、穩(wěn)定性好、成本相對較低

多標(biāo)染色能力強、可視化效果好、操作簡便

缺點

不適用于多標(biāo)染色、對底物量有一定要求

對光敏感、成本可能較高




 

Absin產(chǎn)品線:

爆款產(chǎn)品:試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測);細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠,胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒;分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒);化合物大包裝;輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...

特色產(chǎn)品:雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...

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