肽 (Peptide) 是α-氨基酸脫水縮合，以肽鍵 (-CO-NH-) 連接在一起形成的化合物，是蛋白質(zhì)水解的中間產(chǎn)物。由兩個氨基酸脫水縮合形成的化合物叫做二肽，以此類推三肽、四肽、五肽等。有文獻把由2~10個氨基酸組成的肽稱為寡肽或小分子肽；10~50個氨基酸組成的肽稱為多肽。根據(jù)組成多肽的氨基酸種類和數(shù)量，多肽具有多種生理功能。在醫(yī)學領域，多肽可用于模擬細胞、診斷疾病和疾病治療等方面。此外，多肽還具有抗氧化的護膚作用。因此，多肽在生物、醫(yī)學和化妝品等領域具有重要的應用價值。

一、多肽的保存

多肽的保存分兩種情況：一種是凍干多肽的保存，一種是多肽溶液的保存。

凍干多肽的保存：市售多肽大多數(shù)是以凍干粉的形式提供，必須冷凍干燥保存。其在-20℃比較穩(wěn)定，特別是冷凍干燥后保存于-80℃干燥器中，可以維持幾年的活性。

在使用前，應先將裝有多肽的原瓶置于干燥條件下（如裝有干燥劑的干燥箱）恢復至室溫，否則多肽可能會因為吸潮導致穩(wěn)定性降低。瓶蓋打開后，應快速稱量（微量級多肽可以原瓶溶解，無需稱量），并立刻密封避免潮解。

多肽溶液的保存：溶解后的多肽穩(wěn)定性相對于凍干粉狀態(tài)會差很多，一般建議溶解的多肽儲存液按每次的實驗用量分裝后-20℃保存。避免反復凍融，因為多次凍融會降低多肽的活性。使用時，取儲存液稀釋成工作液，現(xiàn)配現(xiàn)用，當天實驗未用完的少許多肽溶液建議丟棄。

細菌能夠降解多肽，因此多肽需要溶解在無菌的溶劑中（或者用0.2/0.45μm孔徑的濾膜過濾除菌）。 此外，需要注意的是含有天冬氨酸(Asp)、半胱氨酸(Cys)、谷氨酸(Glu)、甲硫氨酸(Met)、色氨酸(Typ)的多肽易被氧化， 需要保存在無氧化劑的環(huán)境中。

二、多肽的溶解

多肽相對一般的生化試劑來說價格比較昂貴，而且溶液狀態(tài)不穩(wěn)定，因此科研人員在使用時需要謹慎。多肽的溶解是非常重要的步驟，溶劑選擇不當會導致多肽不溶或部分溶解，甚至實驗無法進行下去。選擇溶解多肽的溶劑時，通常先用無菌水進行溶解度測試（尤其是只有幾個氨基酸組成的寡肽）。對于其他特殊多肽，應關注組成多肽的氨基酸性質(zhì)（表1），然后確定要溶解的多肽是酸性、中性還是堿性多肽。

表1 常見氨基酸的酸堿性

多肽酸堿性判斷技巧

將多肽序列中的每個酸性氨基酸和C端的羧基-COOH賦值為+1、每個堿性氨基酸和N端的氨基-NH2賦值為-1、中性氨基酸賦值為0，以此為基礎計算整條多肽的值，最終得分為正的稱為酸性多肽，得分為負的稱為堿性多肽，得分為零的稱為中性多肽。

酸性多肽的溶解：先嘗試用水溶解，如果用水不能溶解，嘗試使用13%的氨水(v/v)來溶解，并將多肽溶液稀釋至需要的濃度。如果多肽序列中包含半胱氨酸(Cys)，不能使用堿性溶液進行溶解（在堿性溶液中，半胱氨酸分子會接受質(zhì)子，形成帶正電荷的離子，溶解度會降低。）可以使用二甲基甲酰胺(DMF)或N-甲基吡咯烷酮(NMP)進行溶解。

中性多肽的溶解：通常先用最少量的強有機溶劑溶解。先嘗試使用甲醇、異丙醇或乙腈進行溶解。對于疏水性很強的多肽，先用少量的DMSO（序列中無Cys、Met、Trp ）溶解，再稀釋到需要的濃度。將溶解肽的有機溶劑緩慢地逐滴加入水溶液中，如果溶液變渾濁，可能是達到了溶解極限，不能再繼續(xù)溶解。

堿性多肽的溶解：先嘗試用水溶解，如果不能溶解，嘗試使用10%-30%的醋酸來溶解。如果多肽還是不溶，建議嘗試TFA(<50μL)或純醋酸來溶解，最后將多肽溶液稀釋到需要的濃度。

易聚集肽的溶解：對于Arg、Asp、Asn、Glu、Gln、His、Lys、Ser、Thr、Tyr含量高(>75%)的多肽易聚集（水溶液中易形成多余的分子間氫鍵），可以用6M的鹽酸胍 (Guanidine hydrochloride) 或8M的尿素 (Urea) 溶解制備儲存液，最后稀釋到需要的濃度。

三、多肽應用

客戶案例：NOX2抑制劑gp91 ds-tat (abs45153114)用于進一步驗證人臍靜脈內(nèi)皮細胞 (HUVECs) 在高糖環(huán)境中ROS產(chǎn)生的來源。

產(chǎn)品簡介：gp91 ds-tat是一種有生物活性的肽（NADPH氧化酶組裝肽抑制劑），科學研究中常用作NOX2信號通路抑制劑。 分子式：C109H202N52O25S1；分子量：2673.19；純度：95%。

序列：H-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Cys-Ser-Thr-Arg-Ile-Arg-Arg-Gln-Leu-NH2

實驗方法：

1、人臍靜脈內(nèi)皮細胞接種于6孔板上（5 ×10⁴個/孔）。

2、用PBS、蘆丁、GKT137831（NOX4抑制劑）和Nox2ds-Tat（即gp91 ds-tat）預處理0.5h，然后用高糖處理48h。

3、收集細胞，用10mM DCFH-DA在37℃黑暗條件下孵育30min后用冷PBS洗滌細胞兩次。

4、用流式細胞儀 (Becton，Dickinson and Company，New Jersey，USA) 在激發(fā)波長為488nm，發(fā)射波長為525nm的條件下分析細胞。用Cell Quest軟件 (Moleular Devices Corporation) 計算ROS的相對熒光強度。

實驗結果圖：

* 數(shù)據(jù)來源：Wang W, Wu QH, Sui Y, et al. Rutin protects endothelial dysfunction by disturbing Nox4 and ROS-sensitive NLRP3 inflammasome[J]. Biomedecine & Pharmacotherapie, 2017.

本期小愛為大家介紹了多肽的保存、溶解和文獻應用。多肽是一類非常不穩(wěn)定的化合物，所以我們在使用時最好現(xiàn)配現(xiàn)用。如果您的多肽沒有溶解方法可供參考，建議先用少量肽來測試最適溶解方法，只有當多肽溶解后，才能加入溶液并將之稀釋至最終濃度。愛必信（上海）生物科技有限公司提供多品類生物活性肽，廣泛應用于疾病研究、藥物和疫苗開發(fā)等領域。除此之外，我司還可提供定制服務，包括小分子化合物/多肽/蛋白/抗體的定制及標記服務，體系成熟。

附表：氨基酸簡寫符號

免責聲明：有些多肽在使用前需要做溶解度測試，本文僅供您參考，希望對您溶解多肽有所幫助。

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