答：我們查閱大量文獻(xiàn)，構(gòu)建原發(fā)腫瘤和轉(zhuǎn)移癌的類器官都是用的適合原發(fā)腫瘤的類器官培養(yǎng)基，比如腸癌的原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶，乳腺癌的原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶，所以用原發(fā)部位的癌類器官培養(yǎng)基比較好。

答：轉(zhuǎn)移性的類器官形態(tài)和原發(fā)性的比較像。

答：類器官長的比較大的話，50-100um之間加藥就可以了；長的比較小的類器官50um左右就行了。一般傳代后2-3天，就可以加藥，加藥再培養(yǎng)3-4天可以檢測。

答：直接放在冰上30min，凝固后直接放在70%乙醇里，4℃過夜。

答：可以用組織凍存液梯度凍存放液氮，等條件成熟再復(fù)蘇培養(yǎng)即可。

答：和惡性積液的方法類似，離心回收細(xì)胞，包埋基質(zhì)膠，加類器官培養(yǎng)基。

答：不管是哪種污染，細(xì)菌，霉菌，類器官都必須舍棄，同時(shí)往培養(yǎng)皿中倒入84等消殺試劑，防止傳播。

答：流式分選是可以的，也直接挑取你要的類器官擴(kuò)增即可。一般類器官長到100um肉眼是可見的，直接超凈臺(tái)上，使用200μL移液槍頭直接挑下來類器官，然后進(jìn)行傳代操作。

答：所以一般鋪板后，不會(huì)馬上做藥篩，會(huì)養(yǎng)1~2輪換液周期（3~6天）從新評(píng)估各個(gè)孔的情況，選取合適的孔做實(shí)驗(yàn)。

答：有些24h，有些48h，比如化療藥，每種藥的時(shí)間點(diǎn)是不一樣的，要根據(jù)自己要做的藥物，摸一下時(shí)間梯度。

答：排除掉培養(yǎng)操作技能的影響，肝實(shí)質(zhì)癌類器官，對(duì)于未治療的肝癌組織培養(yǎng)成功率相比治療過的成功率高，可能經(jīng)過治療后的肝癌細(xì)胞活性降低，同時(shí)也和營養(yǎng)體系的優(yōu)化等有一定關(guān)系。

今天講解就到這了，大家如有實(shí)驗(yàn)問題，歡迎入群交流哦！

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