293 [HEK-293] 細胞是經(jīng)人腺病毒5(Ad5)轉(zhuǎn)染而形成的人胚腎細胞永生化細胞系，293細胞包含并表達轉(zhuǎn)染的Ad5基因。293T細胞是293 [HEK-293] 細胞株插入了SV40 T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉(zhuǎn)衍生株，廣泛用于病毒包裝，呈上皮樣，貼壁，營養(yǎng)體系是DMEM+10% FBS。

表1 293T細胞基本信息

圖1 293T [HEK-293T] （人胚腎細胞）

一、首先我們討論的是為啥293T細胞傳代后聚團嚴重？如圖2所示，背景貼壁細胞貼壁良好，形態(tài)正常，而黃色團塊則是因為消化不當形成的細胞團，難以貼壁，并出現(xiàn)了成簇增殖。

圖2 293T [HEK-293T] （人胚腎細胞）

這種情況多半是胰酶消化操作不當導(dǎo)致的細胞聚團：

1）消化過度或吹打過猛導(dǎo)致細胞受傷嚴重，破損的細胞碎片容易粘連聚團；

2）消化時細胞融合率太高，成片脫落，將不容易被吹散，容易聚團。

解決細胞消化不當，要考慮細胞的生長特性，鑒于該細胞貼壁疏松，普通0.25%胰酶消化時間控制在15s-30s；吹打動作輕柔，控制在10-20次；細胞融合率達到80%傳代即可傳代。

二、接下來咱們要討論的是為啥293T換了血清批次后聚團嚴重？如圖3所示，換血清批次后嚴重聚團的293T細胞，細胞形態(tài)難以分辨，黏附在一起。

導(dǎo)致細胞聚團的因素很多，其一是血清批間差導(dǎo)致細胞聚團。血清來源于動物，其組成成分有1000種左右，且血清組成及含量常隨供血動物的年齡、生理條件和營養(yǎng)條件而異。每個批號的組分百分比含量都是不固定的，所以批間差異是存在的。293T細胞本身有聚團生長特性，但嚴重聚團可能受到血清里的某些因子刺激。

圖3 換血清批次后嚴重聚團的293T細胞

如何有效地預(yù)防血清批間差呢？可以通過先用血清試用裝，試用效果好，可購買和血清試用裝批次相同的正裝，囤積半年或一年的用量，有效避免批間差對細胞的影響（胎牛血清在-20℃保存可達5年）。

三、接下來我們要討論的是293T細胞貼壁性問題。通常有兩種情況，

第一種情況是為啥用了新批號的血清，細胞貼壁性變差？如圖4所示，貼壁疏松的293T細胞。

圖4 貼壁疏松的293T細胞

這種情況大概率是血清存在批間差異，而293T細胞本身特點就是貼壁性差，對不同批次的血清適應(yīng)性不同，就容易出現(xiàn)貼壁疏松現(xiàn)象?？蛇m當加高血清比例（最高不超過20%）；建議試好一個血清批次多屯一些，可以避免血清批間差對細胞的影響。

第二種情況是為啥293T細胞從瓶里（例如T25）鋪板到孔里（96孔板），貼壁性變差？這種情況排除掉瓶和孔板本身材質(zhì)或TC（親水處理）處理因素外，293T細胞貼壁性變差極有可能是因為空間的隔離導(dǎo)致細胞自分泌或旁分泌產(chǎn)生的信號分子濃度太低，不利于細胞的貼壁或增殖。建議在鋪板前，對孔板進行明膠（abs9357）包被，可有效促進細胞貼壁。

四、最后咱們要討論的是轉(zhuǎn)染病毒后細胞凋亡嚴重，如圖5所示，是經(jīng)病毒轉(zhuǎn)染后漂浮凋亡的293T細胞。

圖5 經(jīng)病毒轉(zhuǎn)染后漂浮凋亡的293T細胞

為啥293T細胞轉(zhuǎn)染病毒后凋亡嚴重？在排查了方法步驟和轉(zhuǎn)染試劑，依然沒有改善的情況下，可排查一下轉(zhuǎn)染前的營養(yǎng)體系，尤其是血清批間差帶來的影響。很多同學(xué)說前期培養(yǎng)細胞形態(tài)正常呀，其實細胞形態(tài)學(xué)只是鑒別細胞是否健康的一個外在指標，還要結(jié)合細胞其它指標對細胞健康進行評定（比如倍增時間，存活率）。通過更換血清批次，再進行轉(zhuǎn)染實驗并觀察轉(zhuǎn)染后的效果，比較分析出原因。

本期講解就到這里了，下一期您想了解哪種細胞的培養(yǎng)攻略呢？歡迎留言評論哦。如有細胞培養(yǎng)問題，歡迎掃碼加入我們微信群交流哦。

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表2 細胞培養(yǎng)類產(chǎn)品推薦

Absin特色產(chǎn)品線：

WB相關(guān)：ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠；IHC相關(guān)：二抗試劑盒、組化筆；IP/CoIP試劑盒；激動劑/抑制劑；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡試劑盒；呼吸爆發(fā)試劑盒；ELISA試劑盒；重組蛋白；抗體: 二抗、標簽抗體、對照抗體；定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...