細胞消化液的使用方法介紹
更新時間:2022-07-20 點擊次數(shù):1422
一般細胞長至80%-90%密度則需要傳代消化,貼壁細胞傳代前,需要把細胞用消化試劑從培養(yǎng)容器表面解離出來,細胞得以分離成單個懸液傳代至含新鮮培養(yǎng)基的新容器內(nèi)。
細胞消化液使用原料為基因工程方法生產(chǎn)的胰蛋白酶,無動物源性,無病毒污染可能性,且內(nèi)毒素水平低于藥典標(biāo)準(zhǔn)(<0.06EU/mL)??梢蕴娲鷦游镌葱砸鹊鞍酌???捎糜诓溉閯游锛毎㈤g充質(zhì)干細胞等原代細胞。
使用方法:
1、在顯微鏡下觀察細胞,當(dāng)細胞融合度達到90%,即可傳代。
2、在超凈臺/安全柜中,吸走培養(yǎng)瓶中舊的培養(yǎng)液,加入PBS溶液洗一次,加入細胞消化液使之*覆蓋皿/瓶底。
3、室溫孵育4-5分鐘或37℃孵育2-3分鐘(不同細胞類型消化時間略有差異),顯微鏡下觀察到大部分細胞邊緣開始脫離皿/瓶底。
4、加入與消化液等倍體積細胞培養(yǎng)基,用移液器輕輕吹打瓶壁上未*脫離的細胞,并輕輕吹打混勻,使細胞*分散。
5、將細胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中,1200rpm離心3min。
6、棄上清,加入對應(yīng)細胞培養(yǎng)液,重懸細胞,按比例進行傳代,均勻鋪在培養(yǎng)皿/瓶中,置于37℃,5%CO2條件下培養(yǎng)。