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預(yù)染marker的具體要求

更新時(shí)間:2017-05-17      點(diǎn)擊次數(shù):1677
  預(yù)染marker通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加 3000 個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入 6000 個(gè)細(xì)胞。具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定。37℃ 5%CO2 繼續(xù)培養(yǎng)或按照實(shí)驗(yàn)具體需要進(jìn)行培養(yǎng),一般培養(yǎng) 6~24h。按照實(shí)驗(yàn)具體要求,給予 0~20ml 干預(yù)藥物處理,37℃ 5%CO2 繼續(xù)培養(yǎng)至合適時(shí)間。
  預(yù)染marker分子量范圍 – 10 種蛋白分子量范圍在10 到170kDa 之間。易于使用 – 與上樣緩沖液預(yù)先混合,可直接凝膠上樣,無需煮沸。條帶清晰 – 亮度類似,但顏色不同的條帶便于觀察。質(zhì)量檢測 – 每批次均經(jīng)過SDS-PAGE 和Western blotting 驗(yàn)證。兩個(gè)參考條帶 – 70kDa 為橙色,10kDa 為綠色。與膜兼容 – Western blotting 時(shí)彩色條帶將轉(zhuǎn)移到膜上應(yīng)用,監(jiān)測SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳期間蛋白的遷移。監(jiān)測Western blotting 蛋白轉(zhuǎn)移到膜上的情況。測定SDS 聚丙烯酰胺凝膠和Western blots 上的蛋白分子量。
  預(yù)染marker細(xì)胞用含血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長期,常規(guī)胰蛋白酶消化液消化細(xì)胞(懸浮細(xì)胞無需消化)。低速離心,收集細(xì)胞沉淀。用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞沉淀,制備成單細(xì)胞懸液,并計(jì)數(shù)。細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板,一般接種密度為3000~10000個(gè)細(xì)胞/孔。
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