● 凋亡簡介

細(xì)胞死亡有兩種不同的方式：凋亡和壞死。在正常組織中，不需要的細(xì)胞可以發(fā)生主動而自發(fā)的死亡，這種細(xì)胞的程序性死亡也被稱為細(xì)胞凋亡。與壞死不同，細(xì)胞凋亡不伴炎癥反應(yīng)，細(xì)胞被快速清除而不影響組織的整體功能，是真核細(xì)胞死亡zui常見的形式。兩者可根據(jù)死亡細(xì)胞的形態(tài)、生物化學(xué)改變等的不同而加以鑒別。細(xì)胞凋亡在調(diào)控細(xì)胞數(shù)量上發(fā)揮與增值相反的作用，和分化、增值協(xié)調(diào)作用，保持機(jī)體正常生存和動態(tài)平衡*的兩個方面。正常的細(xì)胞凋亡在許多生理過程中包括免疫系統(tǒng)成熟和效應(yīng)機(jī)制、組織、器官和四肢胚胎發(fā)育、神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育以及激素依賴的組織重塑等都是必需的。

● 凋亡異常的相關(guān)的疾病

許多因素都可以誘發(fā)細(xì)胞發(fā)生凋亡，如：某些細(xì)胞被剝奪其生存依賴的細(xì)胞因子（如IL-3、促紅細(xì)胞生成素）或TNF、Fas等死亡受體被激活后都可誘發(fā)凋亡；正常細(xì)胞在遭遇非生理性刺激（如抗腫瘤藥物、離子輻射）時也發(fā)生凋亡。凋亡紊亂（生理性的細(xì)胞凋亡受到抑制或/和病理性的細(xì)胞凋亡過度）在許多疾病諸如缺血、中風(fēng)、心臟疾病、腫瘤、AIDS、自身免疫病、中毒性肝病和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的退行性病變等，都起著重要的作用。如：AIDS表現(xiàn)為被HIV感染的CD4⁺T細(xì)胞大量凋亡，從而造成獲得性免疫缺陷；另外，某些神經(jīng)退行性疾病也是由于特定的神經(jīng)元細(xì)胞發(fā)生凋亡而致；與之相反，凋亡被抑制也對身體造成嚴(yán)重的危害。如果自身反應(yīng)性的B細(xì)胞和T細(xì)胞不能通過凋亡被清除，就會誘導(dǎo)自身免疫性疾病。癌癥也可以看作是細(xì)胞凋亡異常減少的疾病，腫瘤的凈增長就是不斷增加的生長速率與不斷減少的凋亡速率共同作用的結(jié)果。各種抗癌藥物、放射都可以觸發(fā)腫瘤凋亡；腫瘤細(xì)胞對凋亡的敏感性受幾種癌基因的調(diào)控；凋亡可能是癌癥治療的一種預(yù)后標(biāo)志，腫瘤學(xué)上所觀察到的這些凋亡現(xiàn)象已引起人們廣泛而持久的興趣。

● Annexin V-FITC＆PI凋亡檢測試劑盒檢測原理

正常細(xì)胞在凋亡過程中，其細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、核酸以及凋亡相關(guān)蛋白都發(fā)生顯著變化，和正?；驂乃兰?xì)胞相比具有鮮明特征，因此，根據(jù)它們在在形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)上的差別，可以用多種檢測方法將三者區(qū)別開來。其中，Annexin V-FITC＆PI雙染法可借助流式細(xì)胞儀進(jìn)行定量檢測，也可以原位染色的定性檢測。因為該方法簡單、便捷、可同時區(qū)分早期和晚期凋亡，因此是目前檢測細(xì)胞凋亡和凋亡率的zui常用和廣泛的方法之一。

原理：正常細(xì)胞的磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而細(xì)胞凋亡早期開始，細(xì)胞膜的不對稱性發(fā)生顯著改變，即細(xì)胞膜中的PS由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。這種變化早于細(xì)胞皺縮、染色質(zhì)濃縮、DNA片段化。 

Annexin V是一種分子量為35~36kD的Ca²⁺依賴性磷脂存在的環(huán)境結(jié)合蛋白，與PS有高度親和力，故Annexin V在有Ca²⁺存在的環(huán)境中可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的PS與凋亡細(xì)胞的細(xì)胞膜結(jié)合。因此Annexin V被稱為檢測細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。碘化丙錠（Propidium Iodide，PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細(xì)胞膜。凋亡晚期的細(xì)胞和死亡細(xì)胞由于細(xì)胞膜的完整性破壞，通透性增加，PI能夠透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核中核酸染紅。因此將Annexin V-FITC與PI匹配使用，就可以將處于不同凋亡時期的細(xì)胞區(qū)分開來。在熒光顯微鏡下，可觀察到細(xì)胞的染色情況。在流式細(xì)胞儀上，可對正常、早晚期凋亡細(xì)胞進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。

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